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国内重点研究获突破

2018-11-30 20:40:08

国内重点研究获突破

生物通综合:8月是个丰收的季节,在生命科学领域国内也是硕果累累:

AMCase基因突变体克隆成功日前,第四军医大学西京医院皮肤科陈凌硕士等,在军队“十五”医药卫生科研基金资助下,成功地克隆了小鼠酸性哺乳动物几丁质酶(AMCase)基因突变体,相关生物学学信息的明确,为今后运用分子生物学技术进一步深入研究其作用奠定了基础。几丁质又称甲壳质,是大多数真菌细胞壁的主要结构成分。几丁质的催化水解是由几丁质酶完成的,它存在于多种物种体内,现已证明提纯的植物和某些细菌的几丁质酶具有抗真菌活性,可使20多种真菌的芽管解体、菌丝生长受抑制等。酸性哺乳动物几丁质酶(AMCase)是不久前发现的第二种人几丁质酶,其在啮类动物和人身上有一定的同源性,大量存在于胃肠道,小部分存在于肺。序列分析和同源模拟提示,这种几丁质酶可能在消化和防御感染方面具有重要作用。为了克隆小鼠AMCase,并进行序列分析,陈凌硕士等从BALB/c小鼠胃组织中提取总RNA,逆转录成cDNA,运用PCR技术体外扩增获得AMCase基因,构建pMD18-T/AMCase重组载体,测序后应用DNAMAN4.0软件与标准序列进行比较,并通过Si-gnalP3.0和TMHMMServer v.2.0等服务器对等电点、氨基酸组成、信号肽和跨膜结构等特征进行分析。结果发现,所克隆的基因共编码473个氨基酸,分子量为51.93kD,等电点为4.73,与AMCase同源性达99.57%,同属18家族的几丁质酶成员,由信号肽(氨基酸1~21)、催化区(氨基酸22~391)、铰链区(氨基酸392~425)和结合区(氨基酸426~473)组成。编码的蛋白质在催化区和铰链区分别发生了突变,292位氨基酸由丙氨酸(Ala)突变为脯氨酸(Pro),404位氨基酸由苏氨酸(Thr)突变为丝氨酸(Ser)。据陈凌介绍,从几丁质酶这一大家族来看,为了适应环境(特别是微观环境)的变化,其在生物体进化过程中,会发生与种族无关的微小变异,这说明所克隆的基因为AM鄄Case的一个突变体,这种AMCase突变体的出现,可能是哺乳动物几丁质酶适应微观环境的一种表现,这种变化是否会影响其对几丁质底物的催化,以及其抗真菌作用是否会有所改变,有待于进一步深入研究。

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